CC BY
29
© ШЕВЧЕНКО Ю.Н., САВЧЕНКО А.А., ГРИЦАН Г.В.
ОСОБЕННОСТИ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СТАТУСА ТРОМБОЦИТОВ
У БЕРЕМЕННЫХ С ГЕСТОЗОМ РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ
Ю.Н. Шевченко, А. А. Савченко, Г.В. Грицан
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, директор - чл.-корр. РАМН, В.Т. Манчук;
МУЗ «Родильный дом № 1», гл. врач - О.В. Кунилова, г. Красноярск.
Резюме. Целью исследования явилось изучение метаболического статуса тромбоцитов крови у беременных с гестозом различной степени тяжести. Обследована 191 беременная женщина в возрасте 18- 44 лет на сроке беременности 32- 40 недель: 54 женщины с физиологической беременностью, 50 с гестозом легкой степени, 37 с гестозом средней степени, 50 с гестозом тяжелой степени. Установлено, что при гестозе легкой степени увеличивается интенсивность энергетических и пластических процессов в тромбоцитах, а также активность глутатионредуктазы (ГР). При гестозе средней степени активируется субстратный поток между циклом трикарбоновых кислот (ЦТК) и реакциями аминокислотного обмена. При гестозе тяжелой степени уменьшается активность исследуемых НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ, а также уровень ГР в тромбоцитах.
Ключевые слова: беременность, гестоз, тромбоцит, НАД(Ф)-зависимые дегидрогеназы.
Шевченко Юлия Николаевна - Т. (3912) 2251155.Е-таП:
Савченко Андрей Анатольевич - д.м.н., профессор, руководитель лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН; тел. 8(391) 2280-683.
Грицан Галина Викторовна - к.м.н., ассистент каф. анестезиологии и реаниматологии ИПО КрасГМУ, зав. отделением анестезиологии и реанимации МУЗ «Родильный дом №1»; тел. 8(391)2250854.
Основные патофизиологические сдвиги в организме беременных при гестозе сводятся к нарушению микроциркуляции, развитию гиперкоагуляции и гиперагрегации тромбоцитов [3,6,10]. Значительную роль в развитии гиперкоагуляции играют клеточные факторы регуляции гемостаза - тромбоциты [1,11,12]. При этом прогностическим и фундаментальным значением обладает представление об адаптивных возможностях системы гемостаза на уровне метаболических возможностей тромбоцита, как структурно-функциональной единицы при длительном воздействии комплекса неблагоприятных факторов, характерных для гестоза [6,11]. Развитие процессов гиперкоагуляции и гиперагрегации тромбоцитов, исходя из современных представлений о структурном обеспечении функций, должно сопровождаться определенными изменениями метаболических процессов в тромбоцитах [11,12]. Изучение метаболизма в тромбоцитах крови у женщин с физиологической беременностью и при гестозе представляет значительный интерес для выявления связи между энергопродукцией, обменными процессами и динамическими свойствами тромбоцитов. Это обусловлено важной ролью, которая принадлежит тромбоцитам в развитии гиперкоагуляции, лежащей в основе патогенеза гестоза беременных [1,5,7,10].
Таким образом, целью исследования явилось изучение состояния метаболического статуса тромбоцитов у беременных с гестозом различной степени тяжести.
Материалы и методы
Обследована 191 беременная женщина в возрасте 18-44 лет на сроке беременности 32-40 недель. У 54 женщин наблюдалось физиологическое течение беременности, у 50 диагностирован гестоз легкой степени, у 37 - гестоз средней степени, у 50 - гестоз тяжелой степени. Уровни активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в тромбоцитах крови определяли с помощью биолю-минесцентного метода [8,9]. Биолюминесцентный анализ проводили с использованием биферментного препарата, выделенного из Photobacterium leognathi (получен в Институте биофизики СО РАН, г. Красноярск), и биолюминометра
“БЛМ - 8803” (СКТБ “Наука”, г. Красноярск). Данным методом определялась активность следующих ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ, КФ 1.1.1.49), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ, КФ 1.1.1.8), малик-фермента (НАДФМДГ, КФ 1.1.1.40), НАД- и НАДН-зависимой реакции лак-татдегидрогеназы (ЛДГ и НАДН-ЛДГ, КФ 1.1.1.27), НАД- и НАДН-зависимой реакции малатдегидрогеназы (МДГ и НАДН-МДГ, КФ 1.1.1.37), НАДФ- и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФ-ГДГ и НАДФН-ГДГ, КФ 1.4.1.4), НАД- и НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАД-ГДГ и НАДН-ГДГ, КФ 1.4.1.2), НАД- и НАДФ-зависимых изоцитратдегидрогеназ (НАД-ИЦДГ, КФ 1.1.1.41 и НАДФ-ИЦДГ, КФ 1.1.1.42, соответственно) и глутатион-редуктазы (ГР, КФ 1.6.4.2) [8,9]. Активность дегидрогеназ в тромбоцитах крови выражали в ферментативных единицах (Е) на 1 мг белка (1 Е=1 мкмоль/мин [2]). Содержание белка в тромбоцитах определяли по методу Брэдфорда [4].
Статистический анализ осуществляли в пакете прикладных программ Statis-tica 7,0 (StatSoft Inc., 2004). Множественное сравнение величин осуществлялось с помощью критерия Краскел-Уоллиса. Затем наличие попарно достоверных отличий между группами определялось по критерию Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
При исследовании уровней активности НАДФ-зависимых дегидрогеназ в тромбоцитах крови обнаружено, что у беременных с гестозом средней степени относительно контрольного диапазона повышена активность Г6ФДГ (рис. 1, а). У беременных с гестозом легкой степени наблюдается повышение активности НАДФ-ИЦДГ (рис. 1, б). Максимальное повышение уровня НАДФ-ИЦДГ зафиксировано в группе беременных с гестозом средней степени. В группе женщин с гестозом легкой степени выявлено повышение активности ГР относительно контрольного диапазона (рис. 1, в). Только у беременных с гестозом тяжелой степени снижена активность НАДФ-ИЦДГ в 8,1 раз относительно группы женщин с гестозом средней степени и снижен уровень ГР в 1,8 раза относительно контрольного диапазона.
Значительные изменения установлены и в уровнях активности НАД-зависимых дегидрогеназ тромбоцитов у беременных с гестозом разной степени тяжести. Выявляется тенденция снижения активности ЛДГ и НАДН-ЛДГ с увеличением степени тяжести гестоза. У женщин с гестозом легкой и средней степени обнаружено повышение активности аэробной и анаэробной реакции ЛДГ (рис. 2, а, б). Только при гестозе тяжелой степени происходит понижение активности ЛДГ и НАДН-ЛДГ в тромбоцитах крови. Причем, данное понижение проявляется как относительно группы с гестозом легкой степени, так и значений, выявленных при гестозе средней степени.
При гестозе легкой степени относительно контрольного диапазона зафиксировано повышение активности МДГ и НАДН-МДГ (рис. 2 в, г). При гестозе средней степени выявлено максимальное повышение НАДН-МДГ в 14,7 раза относительно контрольного диапазона. Однако при гестозе тяжелой степени понижена активность как МДГ, так и НАДН-МДГ относительно группы с гестозом легкой степени. Причем, понижение НАДН-МДГ проявляется как относительно группы с гестозом легкой степени, так и значений, выявленных при гестозе средней степени. Выявляется тенденция снижения активности НАД-ГДГ и НАДН-ГДГ с увеличением степени тяжести гестоза (рис. 3 а, б). Активность НАДФН-ГДГ при гестозе легкой и средней степени повышена относительно контрольного диапазона (рис. 3, в). В группе беременных с гестозом тяжелой степени понижен уровень НАДФН-ГДГ относительно гестоза легкой и средней степени.
В настоящее время доказано, что именно на уровне метаболической системы клетки формируются ответные реакции на патологическое воздействие. Определяя уровни активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ, можно охарактеризовать основные особенности внутриклеточного метаболизма тромбоцитов, так как исследуемые дегидрогеназы находятся на разных метаболических путях клетки, и по их активности можно судить об особенностях различных сторон внутриклеточного обмена веществ при конкретной патологии [2].
В тромбоцитах у беременных с гестозом легкой степени происходит повышение субстратного потока по гликолизу. В результате высокой интенсивности гликолиза нарабатывается повышенное количество пирувата, который через пируватдегидрогеназный комплекс стимулирует субстратный поток по лимонному циклу. При гестозе легкой степени отмечено увеличение скорости внут-римитохондриального преобразования малата в оксалоацетат и значительное повышение скорости цитоплазматической реакции образования малата из окса-лоацетата, что в целом повышает скорость малат-аспартатного шунта. При гес-тозе легкой степени повышается интенсивность реакций ЦТК и, соответственно, аэробных энергетических процессов. Повышение активности глутаматде-гидрогеназ дополнительно характеризует субстратную стимуляцию реакций ЦТК за счет интермедиатов аминокислотного обмена. Повышение уровня ГР у беременных с гестозом легкой степени определяется компенсаторным повышением активности фермента при увеличении интенсивности перекисных процессов.
При гестозе средней степени наблюдается увеличение наработки интермедиатов для макромолекулярного синтеза в пентозофосфатном пути (ПФП) метаболизма. В группе беременных с гестозом средней степени обнаружено интенсивное протекании процессов гликолиза. В данной группе обследуемых повышается скорость цитоплазматической реакции образования малата из оксало-ацетата. Повышение уровней НАД-ГДГ, НАДН-ГДГ и НАДФН-ГДГ при гесто-зе средней степени свидетельствует об усилении потока субстратов на аминокислотный обмен, что может положительно влиять на реакции синтеза белков.
При гестозе тяжелой степени происходит понижение субстратного потока по гликолизу. В данной группе обследуемых обнаружено снижение активности МДГ и НАДФ-ИЦДГ способствующее понижению субстратного потока по ЦТК. Снижение активности НАД-ГДГ, НАДН-ГДГ и НАДФН-ГДГ говорит о понижении процессов переаминирования в тромбоцитах. Понижение активности ГР свидетельствует, что при гестозе тяжелой степени в тромбоцитах ингибируются процессы перекисного окисления липидов.
Таким образом, установлены особенности состояния метаболических процессов в тромбоцитах у беременных с гестозом разной степени тяжести. У беременных с гестозом легкой степени уровень субстратного обмена между ЦТК и реакциями аминокислотного обмена повышен. В данной группе также повышена интенсивность терминальных реакций гликолиза и активность ГР в тромбоцитах. Характерным для группы беременных с гестозом средней степени является активация субстратного потока между ЦТК и реакциями аминокислотного обмена, а также повышение активности Г6ФДГ, ключевого фермента ПФП. Особенностью внутриклеточных процессов в тромбоцитах у беременных с гестозом тяжелой степени является понижение активности всех исследуемых ферментов в тромбоцитах крови.
PECULIARITIES OF PLATELETS’ METABOLIC STATUS IN PREGNANTS WITH GESTOSIS OF DIFFERENT SEVERITY
U.N. Shevchenko, A.A. Savchenko, G.V. Gritsan
Research Institute of Northern Medical Problems Siberian branch Russian academy of medical science.
Abstract. The aim of research was to study platelet’s metabolic status in pregnancy with of different severity gestosis. We examined 191 women (18-44 years old) at 32nd-40th weeks of pregnancy. Among them 54 women were with physiological pregnancy, 50 had mild gestosis, 37 had gestosis of average severity, and 50 had severe gestosis. It was found that in mild gestosis the intensity of metabolic processes in platelets and activity of glutationreductase increased. Substrate flow between citric acid cycle and aminoacid exchange reactions was activated in average severity of gestosis. In severe gestosis activity of NAD, NAD-dependent dehydrogenases and also glutationreductase decreased.
Key words: pregnancy, gestosis, platelet, NAH (NADP) - dependent dehydrogenases.
Литература
1. Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. Издание 2-ое дополненное. - М.: "Ньюдиамед-АО", 2001. - 296 с.
2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1998. - 704 с.
3. Доброхотова Ю.Э., Ли А. Д. Некоторые аспекты профилактики и лечения тромболитических осложнений в акушерстве // Проблемы репродукции. - 2006. - №2. - 36 с.
4. Д осон Р, Элиот Д, Элиот У, Джонс К. Справочник биохимика / Пер. с англ. - М.: Мир, 1991 - 544 с.
5. М акацария А. Д., Бизадзе В.О. Тромбофилии и противотромботическая терапия в акушерской практике. - М. - 2003. - 25 с.
6. Рогова Е.В. Гестоз и тромбофилические состояния в условиях Западно-Сибирского региона // Омский научный вестник. Патология сосудов и гемостаз. - 2005. - С. 233-234.
7. Савельева Г.М. Некоторые актуальные вопросы акушерства // Акушерство и гинекология. - 2006. - № 3. - С. 3-7.
8. Савченко А.А., Сунцова Л.И. Высокочувствительное определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови биолюми-несцентным методом // Лабораторное дело. - 1989. - № 11. - С. 23-25.
9. Савченко А. А. Биолюминес-центное определение активности НАД- и НАДФ-зависимых глутаматде-гидрогеназ лимфоцитов // Лабораторное дело. - 1991. - № 11. - С. 22-25.
10. Сидорова И.С. Поздний гестоз. -М. - 2003. - 159 с.
11. Шитикова, А.С. Тромбоцитар-
ный гемостаз. - СПб.: Изд-во СПб ГМУ. - 2000. - 227 с.
12. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови / Пер. с англ. - М. - СПб.: "БИНОМ" - "Невский Диалект",
2000. - 448 с.
